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10 nm 孔径、5 µm粒径的TSKgel ODS-80TM 色谱柱和TSKgel ODS-80Ts 色谱柱用于分析小分子化合物,具有4种不同的化学官能团,能满足各种分析需求。B型硅胶基质材料具有高纯度,且几乎不含金属离子杂质。 此类反相柱与单体键合化学物相结合,被公认为制药应用方面的通用分析柱。
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TSKgel ODS-100V 和 TSKgel ODS-100Z 具有与同类色谱柱相比最佳的表面特性,能限制碱性、酸性及螯合化合物的第二类相互作用。利用柱效高和峰形对称性好等优点缩短分析和方法开发的时间! 超高纯度B型硅胶基质材料只含有微量的金属离子杂质。此种硅与单体键合化学物相结合,制成了最好的通用反相柱,适用于质量控制与研发过程中要求最高的分离处理。
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TSKgel ODS-120A 色谱柱采用 15 nm 孔径的硅胶颗粒充填,排阻界限为10,000 Da,此款色谱柱非常适合用于分析肽、小分子蛋白和诸如多环芳烃等环境样品。 "A" 代表色谱柱填料未进行封端处理,如要分析带电样品,经过封端处理的TSKgel ODS-120T 色谱柱是更好的替代选择。 TSKgel ODS-120T 是对填料采用了三甲基硅烷封端处理过的色谱柱,以改善带负电荷分析样品的峰形。
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TSKgel Super-ODS、Super-Octyl 和 Super-Phenyl 色谱柱均由2.3 µm球形硅胶颗粒制备而成,孔径为14 nm。色谱柱的硅颗粒大小非常均匀,能提供超过每米160,000 塔板的柱效率,但其压降可与3 µm颗粒填充柱相媲美。除谱带增宽作用降低而产生的灵敏度提高以外,Super系列的主要优势还在于节省时间和溶剂的消耗量。 注意:Super系列色谱柱的硅颗粒具有相对较小的空隙容积,因此会产生比其它大多数反相柱更短的保留时间。例如,为实现与TSKgel ODS-100V 相似的保留时间,TSKgel Super-ODS 色谱柱的流动相有机溶剂百分比必须减少20~30% 左右。 TSKgel Super-Octyl 和TSKgel Super-Phenyl 色谱柱适用于亲水和疏水肽、胰蛋白酶降解物、肽图分析、低分子量药物、咖啡碱、嘧啶、核苷和核苷酸的高通量分析。
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反相色谱法(RPC)是最常用的色谱分离模式之一,是研究分析小分子量化合物的首选技术手段。近年来,反相色谱法也成为了分离多肽、蛋白质及其它生物分子的公认方法。 TSKgel Protein C4-300 是东曹生命科学最新推出的一款反相色谱柱。它是专门针对重组蛋白、抗体片段或PEG蛋白等蛋白质样品的高分辨率分析而设计。TSKgel Protein C4-300 色谱柱的孔径为30 nm,是分离蛋白质的理想选择。 TSKgel TMS-250 色谱柱是RPC法分析分子量较大蛋白质的理想选择。包含一个独特的C1键合相,填料是通过将三甲基硅烷基单体结合到孔径为25 nm的球形硅胶上制备而成。由于配体的疏水性较低,即使分析分子量较大的蛋白样品仍然可以得到优异的回收率。相对于大孔径的C18柱,醛缩酶(158kDa)等蛋白质可显示出尖锐的峰形。
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TSKgel ODS-140HTP 色谱柱是采用高压方式将粒径2.3 µm的填料装填于其中,是一款可以进行高通量分析(高速/高分离效果)的反相色谱柱。 与常规的3 µm或5 µm粒径的ODS色谱柱相比,可以进行高速、高分离效果的分析测定。与粒径小于2 µm的超高压色谱柱相比,其又可以使用在普通的HPLC系统上而获得高通量的分析测定。
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聚甲基丙烯酸基质的反相色谱柱有较宽的孔径和粒径范围可供选择。尽管在分辨率和稳定性方面不如硅胶基质的反相色谱柱,但是聚合物基质的色谱柱具有以下优势: 更宽的pH使用范围(1-12),可使许多碱性化合物在非带电形式下得到分析,从而减少二次相互作用发生,进而改善样品峰形。 由于二次相互作用的降低,大大改善了多肽和蛋白的回收率。
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反相是应用最广的HPLC保留方式,但极性很大的化合物常常不能充分保留在低百分比有机相中,甚至不能保留在100%含水流动相中。对于含有相同组分的样品,正相洗脱顺序与RPC中的洗脱顺序正好相反。尽管正相LC在传统上采用非极性有机流动相和硅固定相,但如今,多数正相分离法均采用含水有机流动相和极性较强的键合固定相。该HPLC方式目前普遍称为HILIC,即亲水作用色谱法。 如果采用强极性键合相(如TSKgel Amide-80),正相或亲水作用色谱法(HILIC;见参考资料)可改善极性化合物的保留行为,其保留机理是使用乙腈与乙酸铵缓冲液的混合流动相。与反相保留行为相反,在HILIC中,通过增加乙腈百分比可更长时间地保留样品中的极性成分。
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阳离子交换色谱法采用含有硫离子的强阳离子或含有羧甲基(CM)官能团的弱阳离子交换剂。抗衡离子(常为 Na+)维持电中性。 在离子交换色谱法中,流动相缓冲剂的 pH 值必须在电荷分子 pI 值或 pKa 值与固定相上电荷基团的 pKa 值之间。例如,在阳离子交换色谱法中, pI 值为 8.2 的分子在 pH 6.0 的流动相缓冲剂中溶解,同时固定相 pKa 值为 1.2。
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阴离子交换色谱法采用含有季铵离子的强阴离子或采用具有叔胺或仲胺官能团(如DEAE,即二乙氨乙基)的弱阴离子交换剂。抗衡离子(常为 Cl- )维持电中性。 在离子交换色谱法中,流动相缓冲剂的pH 值必须在电荷分子 pI 值或 pKa 值与固定相上电荷基团 pKa 值之间。例如,在阴离子交换色谱法中, pI 值为 6.8 的分子在 pH 值为 8.0 的流动相缓冲液中解离,同时固定相 pKa 为 10.3。
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