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质粒DNA色谱分析、分离的推荐选择！
发布时间：
2022-10-20 11:15
质粒DNA色谱分析、分离的推荐选择！
使用TSKgel和TOYOPEARL®助力质粒载体关联治疗药物的研发
尽管在新品快讯（TSKgel®、TOYOPEARL®）No. 15中，介绍了在分析、分离纯化病毒载体时使用了分析用TSKgel色谱柱以及制备用填料TOYOPEARL的论文和技术资料，但也收到了很多在分析、分离纯化质粒DNA时的应用实例报告。目前整理的论文和技术资料如下。
● 分析、分离质粒载体时使用的层析分离模式
分离模式 |
分离方法 |
分离机理 |
去除杂质 |
纯化步骤 |
备注 |
尺寸排阻色谱(SEC) |
等度分离 |
分子尺寸的差异 |
延迟洗脱 |
初期粗纯 |
样品加载量少， |
阴离子交换色谱(AIEC) |
吸附/梯度洗脱 |
电荷的差异 |
流穿或梯度 |
捕获 |
可以分离质粒异构体， |
疏水色谱(HIC) |
流穿 |
疏水性的差异 |
疏水性的差异 |
捕获 |
与AIEC相比， |
Ref.: S. Palmieri et al., BioProcess International, 2011, Lonza webinar, modified
● 使用TSKgel和TOYOPEARL分析、分离质粒载体的实例（文献、技术资料）
年 |
分离模式 |
色谱柱 |
目标、关键词 |
论文标题 |
2008 |
SEC, IEC, HIC |
TSKgel G-DNA-PW, G6000PWXL, DNA-NPR®, Butyl-NPR |
质粒DNA |
Characterization of Plasmid DNA Samples by Chromatographic Methods |
2007 |
IEC |
TSKgel DNA-NPR |
质粒DNA |
Separation of topological forms of plasmid DNA by anion-exchange HPLC: Shifts in elution order of linear DNA |
2005 |
SEC |
TSKgel G-DNA-PW, G6000PWXL |
质粒DNA |
High-speed chromatographic purification of plasmid DNA with a customized biporous hydrophobic adsorbent |
2004 |
IEC |
TSKgel DNA-NPR |
质粒DNA |
Effective and robust plasmid topology analysis and the subsequent characterization of the plasmid isoforms thereby observed |
2019 |
AFC |
精氨酸固定化 |
超螺旋质粒DNA |
Effect of Chromatographic Conditions on Supercoiled Plasmid DNA Stability and Bioactivity |
2005 |
HIC |
Butyl-650M |
质粒DNA |
Improved downstream process for the production of plasmid DNA for gene therapy |
使用TSKgel阴离子交换色谱柱（AIEC）分离质粒载体的实例
色谱柱：TSKgel DNA-NPR (2.5 µm, 4.6 mm ID × 7.5 cm)
洗脱液： 缓冲溶液A：20 mmol/L Tris-HCl (pH 9.0)
缓冲溶液B：含有1 mol/L NaCl的缓冲溶液A
缓冲溶液B：从50%到65%的10 CV的线性梯度
流速：1 mL/min
检测：UV (260 nm)
样品：PUC19 质粒
在纯化质粒DNA（载体）时，除了需要去除混入的宿主的基因组DNA和RNA、蛋白质等杂质以外，还需要去除质粒DNA的立体异构体Open circular（oc-）体、Linear体。只纯化Supercoiled（closed circular: cc-）体。
● 质粒载体的纯化步骤示例
下述层析步骤组合适用于质粒DNA的纯化工艺。
· SECà混合模式层析（Thiophilic Interaction Chromatography）àAIEC（A公司）
· HICàAIECàSEC（B公司）
· AIECàHIC（C公司）
· HIC（流穿：FT）àHIC（D公司）
· 其他：固定化金属螯合亲和层析（IMAC）
羟基磷灰石层析
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